3 по валидации аналитических методик. Общие положения. В части I настоящего Руководства приведен перечень. Добрый вечер! Алина, прошу Вас также выслать и мне ' Руководство по валидации методик.

• Руководство По Валидации Аналитических Методик Еаэс
• Руководство По Валидации Аналитических Методик
• Руководство По Валидации Аналитических Методик Проведения Испытаний Лекарственных Средств
• Руководство Еврахим Валидации Аналитических Методик

Н., доцент кафедры «Стандартизация, метрология и информационны е системы», ведущий научный сотрудник научно-исследовательской лаборатории оптико-электронного приборостроения, БИТУ О. Н, доцент кафедры «Стандартизация, метрология и инф ормационны е системы», БИТУ А. САРАКАЧ, студентка кафедры «Стандартизация, метрология и инф ормационны е системы», БИТУ В. БОБРОВИЧ студентка кафедры «Стандартизация, метрология и инф ормационны е системы», БИТУ ПРАКТИЧЕСКИЕ РЕКОМЕНДАЦИИ ПО ВАЛИДАЦИИ РЕЗУЛЬТАТОВ И МЕТОДОВ ИЗМЕРЕНИЙ В последние десятилетия особую актуальность приобретаю т вопросы обеспечения доверия к результатам и методам и зм ерений парам етров продукции. Это обусловлено стремительным развитием научно-технического прогресса и, как следствие, усложнением технических объектов и возникновением новых технологий. Продукция различных категорий, приобретая все новые потребительские свойства, становится одновременно источником дополнительной ценности и потенциальной опасности для потребителя и окруж аю щ ей среды, поэтому возникает острая необходимость уж е сточения требований к видам и методам ее контроля. Измерения играют важнейшую роль в системе обеспечения качества продукции при контроле и испытаниях, и в этом контексте гарантией надежности, достоверности и точности результатов и методов измерений является процедура валидации.

Нормативные документы дают крайне общие подходы к проведению валидации и документированию ее этапов. Промышленные предприятия при проведении валидации методик выполнения измерений (далее МВИ) используют собственны е протоколы и отчеты, составленные в свободной форме и не всегда отвечаю щие предъявляемым к этим документам требованиям. В связи с этим сущ ествует острая необходимость в проведении исследований, разработке методов и реко м ендаци й по валидации МВИ, а такж е других видов документов, позволяющих структурировать и униф ицировать работу в данной области.

Сущность и необходимость валидации В настоящее время действуют несколько непротиворечащих определений валидации. Согласно СТБ ИСО 9000 валидация подтверждение на основе представления объективных свидетельств того, что требования, предназначенные для конкретного использования или применения, выполнены. В примечаниях сказано, что термин «подтверждено» используется для обозначения соответствующего статуса. Условия применения могут быть реальными или смоделированными 1.

В соответствии с СТБ ИСО/МЭК валидация подтверждение путем экспертизы и представления объективного доказательства того, что особые требования, предназначенные для конкретного применения, соблюдены 2. Согласно руководству ЕС по принципам надлежащей практики (GMP) валидация методики испытаний документированное подтверждение обоснованности (правильности) выбора методики испытаний, 12 Техническое нормирование, стандартизация и сертификация в строительстве 2 гарантирующее получение ожидаемых и воспроизводимых результатов, соответствующих поставленной цели 3. В GMP термин «валидация» соотносят с понятием квалификации.

Согласно 1 процесс квалификации процесс демонстрации способности выполнить установленные требования. Термин «квалифицирован» используется для обозначения соответствующего статуса. Квалификация может распространяться на работников, продукцию, процессы или системы. В литературных источниках приводятся следующие разновидности квалификации и валидации: квалификация проекта (DQ), квалификация монтажа (IQ), квалификация функционирования (0Q), квалификация эксплуатации (PQ), валидация технологического процесса (PV), а также «валидация аналитических методик (AV)», «валидация методик испытаний», «валидация методик очистки (CV)», «квалификация и валидация работы систем». В первой редакции рабочего проекта ТКП 3.06 приводятся такие виды валидации, как перспективная (при разработке новой продукции до начала серийного производства продукции), сопутствующая (во время серийного производства, если перспективная не была завершена или произошли изменения в процессе производства), ревалидация (во время серийного производства при модификации оборудования, изменениях в составе сырья, упаковочных материалов, условиях) 4.

На начальном этапе валидация получила распространение в аналитических измерениях в пищевой и фармацевтической промышленности, бытовой химии и т. Д., а затем стала общепринятой практикой в других областях. Представители химического сообщества обосновывают необходимость валидации важностью аналитических измерений практически во всех аспектах жизни общества в той или иной форме, высокими расходами на проведение измерений, а также дополнительными расходами на иски и штрафы, связанные с разрешением возникающих разногласий по поводу достоверности результатов измерений 5.

Кроме того, проведение процедуры валидации является «профессиональным долгом химика- аналитика», что обусловлено ответственностью перед заказчиками, необходимостью формирования доверия к результатам и методам измерений 5,6. В 4,7-9 приведены следующие преимущества валидации: способствование предоставлению гарантий эффективности и безопасности применения продукции на протяжении всего срока годности; удовлетворение требований заказчика в части точности и достоверности результатов измерений 4; возможность экспорта 4. Параметры, определяемые при валидации в самом общем случае: точность (accuracy); специфичность (specificity); робастность (robustness); предел обнаружения (lim it of detection); предел количественного определения (limit of quantitation); линейность (linearity); интервал метода, диапазон применения (range); чувствительность (sensitivity); неопределенность (uncertainty). Согласно СТБ ИСО/МЭК «лаборатория должна валидировать нестандартные методы, методы, разработанные лабораторией, стандартные методы, применяемые для более широких целей, чем они предназначены, а также усложненные и модифицированные стандартные методы, чтобы подтвердить, что данные методы подходят для применения по назначению»; «лаборатория должна зарегистрировать полученные результаты, методику, используемую для валидации методов, и заявить о том, подходит ли данный метод для применения по назначению». В соответствии сданным документом различают следующие способы валидации: 1) калибровка с применением исходных эталонов или образцовых веществ; 2) сравнение с результатами, полученными с помощью других методов; 3) межлабораторные сличения; 4) систематическая оценка факторов, влияющих на результат; 5) оценивание неопределенности результатов, основанное на научном понимании теоретических принципов метода и практического опыта работы с ним.

Таким образом, на современном этапе можно выделить два основных подхода к проведению валидации: внутрилабораторный и межлаборатор- ный (рис. Внутрилабораторный подход Оценка стандартных неопределенностей 1 М а т е м а ти ч е с к а я м о д е л ь? Диапазон и точность значений, достигаемых с помощью валидиро- ванных методов (например, неопределенность результатов, предел обнаружения, избирательность метода, линейность, предел повторяемости и (или) воспроизводимости, устойчивость к внешним воздействиям и (или) поперечная чувствительность к помехе от матрицы образца (испытываемого объекта), как это оценено для применения по назначению, должны соответствовать потребностям заказчиков. Валидация включает описание требований. Определение характеристик методов, проверку того, что требования можно выполнить с помощью данного метода, и заявление о достоверности. По мере продолжения разработки метода требуется регулярно проводить анализ для проверки того, что требования заказчика все еще выполняются, любое изменение требований, которое влечет за собой внесение изменений в план разработки, следует утвердить и получить на это санкцию.

Валидация это всегда равновесие между затратами, рисками и техническими возможностями. Существует много случаев, когда диапазон и неопределенность значений (например, точность, предел обнаружения, избирательность, линейность, повторяемость, воспроизводимость, устойчивость и поперечная чувствительность) могут быть заданы упрощенно вследствие отсутствия информации 2. В зависимости от решаемой измерительной задачи и области измерений для проведения валидации выбираются определенные показатели, но в обязательном порядке присутствуют точность, предел обнаружения и неопределенность.

Руководство По Валидации Аналитических Методик Еаэс

В статье сделан краткий обзор параметров, определяемых при валидации, и даны практические рекомендации по их расчету применительно к большинству решаемых задач. О пределение изм еряем ой величины. Список составляющих неопределенности Контроль метода по СТБ ИС05725 Межлабораторный подход РТ или анализ выполнения м етода?i. Закон распространения неопределенностей Учет других вкладов (неопределенности смещения и тд.) Оценка точности метода по С Т Б И СО 5725 I Ком бинированна подход по ISO Проверка квалификации по ISO 43.

IS f Изменчивость и неопределенность неучтенных влиянии П о д хо д м одел и ро ван и я Подход контроля Подход и«алдоорлторного Подход РТ о д н о й лаоорлтормн ко нтроля I I Рис. Рациональные подходы к проведению валидации Техническое нормирование, стандартизация и сертификация в строительстве 3 Показатели точности результатов и методов измерений В современной метрологии определение понятия точности как важнейшего показателя качества процесса измерений расширено применительно к испытаниям. Если в классической теории погрешностей согласно РМГ точность результата измерений (точность измерений) одна из характеристик качества измерения, отражающая близость к нулю погрешности результата измерения (считают, что чем меньше погрешность измерения, тем больше его точность) 10, то в соответствии с Международным словарем по метрологии (далее VIM) точность измерения близость согласования между измеренным значением величины и истинным значением измеряемой величины 11. В то же время СТБ ИСО 5725 использует понятие точности применительно I Л П р авильн ость Лабораторное смещ ение Смещ ение метода измерения Лабораторная составляю щ ая смещ ения к результатам измерений в испытаниях, как «близость результата испытаний (измерений) к принятому эталонному значению величины» 12. При этом для описания точности метода измерений используются два термина правильность и прецизионность. Правильность близость среднего значения, полученного на основании большой серии результатов испытаний (измерений), к принятому эталонному значению величины. Показатель правильности обычно выражают в терминах смещения.

Правильность иногда понимают как «точность среднего значения». Применение данного термина не рекомендуется. Прецизионность близость между независимыми результатами измерений (испытаний), полученными при определенных принятых условиях. Прецизионность зависит только от распределения случайных ошибок и не связана ни с истинным значением, ни с заданным значением. Показатель прецизионности обычно выражают в терминах рассеяния и вычисляют как стандартное отклонение результатов измерений (испытаний). Малой прецизионности соответствует большее стандартное отклонение.

Условия повторяемости и воспроизводимости являются совокупностями предельных условий, представляющими собой частный случай. Знание правильности и прецизионности метода измерений позволяет оценить смещение и повторяемость результатов лаборатории и проверять стабильность ее репутации. Правильность и прецизионность должны определяться на основании серии результатов измерений, про- контролируемых участвующими в эксперименте лабораториями, с их систематизацией под руководством комиссии специалистов, созданной для данной цели. Такого рода межлабораторный эксперимент носит название «эксперимента по оценке точности». Эксперимент по оценке точности часто можно рассматривать в качестве практической проверки адекватности стандартного метода измерений.

Одной из основных целей стандартизации является устранение различий между пользователями (лабораториями) насколько это возможно, и чтобы данные, полученные в эксперименте, свидетельствовали о том, насколько эффективно данная цель была достигнута. Явные различия во внутрилабораторных расхождениях или между средними значениями по лабораториям могут указывать на то, что стандартный метод измерений еще недостаточно детализирован и по всей вероятности может быть улучшен. Если это так, то об этом необходимо сообщить в орган, ответственный за стандартизацию, вместе с запросом о дальнейшем изучении. Показатели правильности и прецизионности, оцениваемые при валидации, представлены на рис.

Смещение разность между математическим ожиданием результатов испытаний и принятым эталонным значением. Смещение это общая систематическая ошибка в противоположность случайной ошибке. П овторяем ость. Точность П рецизионность Промежуточные показатели прецизионности I Дисперсия 1 I. Дисперсия ' Дисперсия повторяемости 1 прецизионности в1 1 воспроизводимости Предел 1.

Промежуточных 1. Предел повторяемости 1 воспроизводимости Рис.

Показатели правильности и прецизионности i Воспроизводимость Может быть один или несколько компонентов, образующих систематическую ошибку. Большая систематическая ошибка соответствует большему значению смещения. Лабораторное смещение разность между математическим ожиданием результатов испытаний, полученных в отдельной лаборатории, и принятым эталонным значением. Смещение метода измерений разность между математическим ожиданием результатов испытаний, полученных во всех лабораториях, использующих данный метод, и принятым эталонным значением. Повторяемость прецизионность в условиях повторяемости. Условия повторяемости условия, при которых независимые результаты испытаний получены одним методом на идентичных образцах испытаний в одной лаборатории одним оператором с использованием одного оборудования и за короткий интервал времени.

Воспроизводимость прецизионность в условиях воспроизводимости. Условия воспроизводимости условия, при которых результаты испытаний получены одним методом на идентичных испытательных образцах в различных лабораториях разными операторами с использованием различного оборудования.

Предел повторяемости г такое значение, что абсолютная разность между двумя результатами испытаний, полученными в условиях повторяемости, будет ожидаться меньше его или равной ему ср = 0,95. Предел воспроизводимости R такое значение, что абсолютная разность между двумя результатами испытаний, полученными в условиях воспроизводимости, будет ожидаться меньше его или равной ему ср = 0,95. Статистическая модель результата измерения (испытания), приведенная в СТБ ИСО 5725, имеет вид: где у результат испытаний; т общее среднее значение (мат. Ожидание); у = т + В + е, (1) В лабораторная составляющая смещения согласно условиям повторяемости; е случайная ошибка. Член т представляет собой уровень измерений (испытаний) математическое ожидание серии измерений, и часто определяется исключительно методом измерений. Не всегда соответствует истинному значению/;: 14 Техническое нормирование, стандартизация и сертификация в строительстве. 4 m = ij + 6, (2) S t i = d j - s i (Ю ) где 6 смещение метода измерений.

Член m должен быть постоянным на протяжении любой серии испытаний, осуществляемых согласно условиям повторяемости. Где sh = р ^ Х пи(уч- yjу (и) Член В дисперсия, называемая межлабораторной дисперсией: Var(B) = o2l, (3) где оч. Включает изменчивости между операторами и оборудованием. Статистическая модель с учетом вкладов случайных величин: где В(щ У = т + В(о)+ В п)+ В (2) е ' фиксированное воздействие; В(1Г В(2) факторы в промежуточных условиях прецизионности. Член е представляет собой случайную ошибку, имеющую место в каждом измерении. В пределах одной лаборатории ее дисперсия (согласно условиям повторяемости) носит название внутрилабораторной дисперсии: m (e ) = oi W.

(5) Общее значение внутрилабораторной дисперсии для всех лабораторий, пользующихся методом измерений, оценивается средним арифметическим: o2r= v a r(e ) = o1w. (6) Исследование прецизионности и правильности В качестве показателей прецизионности требуются две величины: стандартное отклонение повторяемости: O r = J v a r(e ); стандартное отклонение воспроизводимости Стандартные отклонения повторяемости и воспроизводимости для любого стандартного метода измерений должны определяться согласно методам, изложенным в ИСО ИСО Количество участвующих лабораторий определяют по специальным таблицам с использованием коэффициентов, характеризующих соотношение стандартных отклонений воспроизводимости и повторяемости, оценки неопределенности, количества серий и т. Выбор количества лабораторий должен быть компромиссом между наличием ресурсов и желанием снизить неопределенность оценок до приемлемого уровня. Для каждого уровня (серии) рассчитывают три дисперсии: дисперсию повторяемости, межлабораторную дисперсию и дисперсию воспроизводимости. Дисперсия повторяемости составит: s?uk l) ^ (7) (8) (9) р 71? Т п ч 1=1 (12) Если из-за случайных эффектов для S f^ j из приведенных формул получается отрицательное значение, то допускается, что оно равно нулю. Дисперсия воспроизводимости составит: S R j = S r j + S L j (13) Анализ на совместимость и наличие выбросов осуществляется по данным, собранным на определенном количестве уровней.

При этом должны быть оценены стандартные отклонения повторяемости и воспроизводимости. Наличие отдельных лабораторий или значений, которые представляются несовместимыми со всеми остальными лабораториями или значениями, может изменить оценки, и по отношению к таким значениям должны приниматься решения. Вводятся два подхода к решению: Правильность оценивается смещением метода и лабораторным смещением.

1) метод графической совместимости (используют две меры, носящие названия статистик Манделя h и к); 2) числовые критерии выбросов (используют критерии Кохрена и Граббса). Смещение метода измерений S, может быть рассчитано из выражения: где у общее среднее значение всех результатов испытаний, полученных всеми лабораториями на определенном уровне эксперимента; ц принятое эталонное значение. Лабораторное смещение А во время проведения эксперимента находят по формуле: А = У - Ц, (15) где у среднее арифметическое значение всех результатов, полученных лабораторией на определенном уровне эксперимента (серии). Другие показатели, оцениваемые при валидации, перечисленные выше, включаются в план валидации в зависимости от вида контроля (по качественному или количественному признаку) и области измерений.

Дадим краткие характеристики каждому из них согласно ТКП Специфичность (specificity) способность однозначно оценивать определяемый компонент выбранным методом независимо от присутствующих веществ (примеси, продукты распада и т. Д.) в анализируемом образце в пределах заданного диапазона применения. В практике анализа это понятие часто используются для качественного описания методики. Для полной количественной характеристики методики анализа нужно знать зависимость результатов определения концентрации от состава анализируемых проб (часто говорят о влиянии матрицы пробы, влиянии «третьих» элементов при элементном анализе и т. Д.), а также от физикохимических свойств проб и от возможных изменений условий анализа.

Робастность (robustness) способность методики испытаний давать результаты анализа с приемлемой прецизионностью и правильностью при небольших умышленных изменениях параметров методики Межлабораторная дисперсия составит: испытаний. Робастность является качественным понятием.

Руководство По Валидации Аналитических Методик

Как известно, (14) Техническое нормирование, стандартизация и сертификация в строительстве 5 на результаты измерений может влиять большое число факторов. Обычно робастной считается методика, для которой ни один из таких факторов не имеет значимо большего (по сравнению с другими факторами) влияния на результаты измерений. Робастность оценивается на этапе проектирования методики после оценки неопределенности. Предел обнаружения (limit o f detection) количество определяемого компонента в анализируемом образце, которое может быть обнаружено выбранным методом, но необязательно определено количественно как точное значение.

Предел обнаружения соответствует минимальному аналитическому сигналу, значимо превышающему сигнал фона.

1 УТВЕРЖДЕНЫ Решением Коллегии Евразийской экономической комиссии от 20 г. Р У К О В ОДСТВО по валидации аналитических методик ЧАСТЬ I: ВАЛИДАЦИЯ АНАЛИТИЧЕСКИХ МЕТОДИК: ОБЩИЕ ПОЛОЖЕНИЯ 1. ВВЕДЕНИЕ В части I настоящего документа приведен перечень характеристик, подлежащих оценке при валидации аналитических методик и включению в регистрационные досье, подаваемые в уполномоченные органы государствчленов Евразийского экономического союза (далее государства-члены). Текст части I настоящего документа содержит только перечень терминов и их определений и не является руководством по процедуре валидации аналитических методик. Приведенные в Руководстве термины и определения призваны устранить разногласия, существующие между уполномоченными органами государств-членов. Целью валидации аналитической методики является документированное подтверждение ее пригодности для своего целевого назначения. В таблице приведены характеристики, используемые в испытаниях на идентификацию (в том числе подлинность), контроль примесей и количественного определения.

4 валидационные характеристики для валидации различных типов аналитических методик. Этот перечень следует рассматривать как типовой при валидации аналитических методик, возможны исключения, требующие отдельного обоснования производителем лекарственного средства. Такая характеристика аналитической методики, как устойчивость (робастность) (robustness), не приведена в таблице, но ее следует рассматривать на соответствующем этапе разработки аналитической методики. Повторная валидация (ревалидация) требуется в следующих случаях (но не ограничивается ими): 1. Изменение синтеза фармацевтической субстанции; 2. Изменение состава лекарственного препарата; 3. Изменение аналитической методики.

Повторная валидация может не проводиться если производителем представлено соответствующее обоснование. Объем повторной валидации зависит от характера изменений. 4 5 ТАБЛИЦА Тип аналитической методики испытания на количественные Валидационные Испытания примеси испытания характеристики на Количест- Преде- растворение идентификацию венно льное (только измерение) содержа- содержа содержание/активвеннольное ние ние ность Правильность + + Прецизионность: - повторяемость промежуточная прецизионность + 1) + 1) Специфичность 2) Предел обнаружения 3) + Предел количественного + определения Линейность + + Диапазон + + применения Примечание условные обозначения, принятые в таблице: данную характеристику не оценивают; «+» данную характеристику оценивают. 1) Если определена воспроизводимость, определение промежуточной прецизионности не требуется. 2) Недостаточная специфичность одной аналитической методики может быть компенсирована использованием одной или нескольких дополнительных аналитических методик. 3) Может потребоваться в некоторых случаях (например, когда предел обнаружения и нормируемый предел содержания определяемой примеси близки).

5 6 ГЛОССАРИЙ 1. АНАЛИТИЧЕСКАЯ МЕТОДИКА (ANALYTICAL PROCEDURE) Под аналитической методикой понимается описание проведения испытания. Аналитическая методика должна подробно описывать последовательность действий, необходимых для выполнения аналитического испытания, включая в себя описание подготовки испытуемых образцов, стандартных образцов, реактивов, использования оборудования, построения градуировочной кривой, используемых расчетных формул и т.д. СПЕЦИФИЧНОСТЬ (SPECIFICITY): Способность аналитической методики однозначно оценивать определяемое вещество независимо от других веществ (примеси, продукты деградации, вспомогательные вещества, матрица (среда) и др.), присутствующих в испытуемом образце. Недостаточная специфичность одной аналитической методики может быть компенсирована использованием одной или нескольких дополнительных аналитических методик. Специфичность для различных видов испытаний означает следующее: в испытании на идентификацию подтверждение того, что методика позволяет идентифицировать именно определяемое вещество; в испытании на примеси подтверждение того, что методика позволяет правильно распознать примеси в образце (например, испытание на родственные соединения, тяжелые металлы, содержание остаточных растворителей и т.д.); в количественных испытаниях подтверждение того, что методика позволяет установить содержание или активность именно определяемого вещества в образце.

ПРАВИЛЬНОСТЬ (ACCURACY, TRUENESS) Правильность аналитической методики выражает близость между принятым истинным (опорным) значением и полученным значением. Правильность выражают величиной открываемости. 3.1.Открываемость (recovery) Открываемость (извлекаемость) соотношение между полученным средним и истинным/опорным значениями с учетом соответствующих доверительных интервалов. ПРЕЦИЗИОННОСТЬ (PRECISION) Прецизионность аналитической методики выражает близость (степень разброса) результатов (значений) между сериями измерений, проведенными на множестве проб, взятых из одной и той же однородной пробы, в предписанных методикой условиях. Прецизионность устанавливается на трех уровнях: повторяемость, промежуточная прецизионность и воспроизводимость. Прецизионность следует устанавливать с использованием однородных аутентичных образцов.

В случае невозможности получения однородного образца допускается определение прецизионности с помощью искусственно приготовленных (модельных) образцов или раствора образца. Прецизионность аналитической методики, как правило, выражается величиной дисперсии, стандартного отклонения или коэффициента вариации серии измерений Повторяемость (repeatability) Повторяемость характеризует прецизионность методики при выполнении повторных испытаний в одинаковых рабочих условиях (например: одним и тем же аналитиком или группой аналитиков, на одном и 7 8 том же оборудовании и с одними и теми же реактивами и т.д.) в течение короткого промежутка времени. Ее также называют прецизионностью внутри методики (intra-assay precision) Промежуточная (внутрилабораторная) прецизионность (intermediate precision) Промежуточная прецизионность характеризует влияние вариаций внутри лаборатории (разные дни, разные аналитики, разное оборудование, разные серии (партии) реактивов и т.д.) на результаты испытаний отдельных идентичных образцов, отобранных из одной и той же серии Воспроизводимость (reproducibility) Воспроизводимость характеризует прецизионность в межлабораторных испытаниях. ПРЕДЕЛ ОБНАРУЖЕНИЯ (DETECTION LIMIT) Предел обнаружения аналитической методики наименьшее количество определяемого вещества в образце, которое может быть обнаружено, но не обязательно точно количественно определено. ПРЕДЕЛ КОЛИЧЕСТВЕННОГО ОПРЕДЕЛЕНИЯ (QUANTITATION LIMIT) Предел количественного определения аналитической методики наименьшее количество вещества в образце, которое можно количественно определить с соответствующей прецизионностью и правильностью. Предел количественного определения является необходимой валидационной характеристикой методик, используемых для определения низких содержаний веществ в образце, в частности для определения примесей и/или продуктов деградации.

ЛИНЕЙНОСТЬ (LINEARITY) Линейность аналитической методики - наличие прямо пропорциональной зависимости аналитического сигнала от концентрации (количества) определяемого вещества в образце в пределах диапазона применения (аналитической области) методики. ДИАПАЗОН ПРИМЕНЕНИЯ (АНАЛИТИЧЕСКАЯ ОБЛАСТЬ) (RANGE) Диапазон применения аналитической методики интервал между наибольшей и наименьшей концентрациями (количествами) определяемого вещества в образце (включая эти концентрации), для которого показано, что аналитическая методика имеет приемлемый уровень прецизионности, правильности и линейности. УСТОЙЧИВОСТЬ (РОБАСТНОСТЬ) (ROBUSTNESS) Способность аналитической методики быть устойчивой к влиянию небольших задаваемых изменений в условиях выполнения испытания, которая указывает на ее надежность при обычном (стандартном) использовании. ЧАСТЬ II ВАЛИДАЦИЯ АНАЛИТИЧЕСКИХ МЕТОДИК: МЕТОДОЛОГИЯ ВВЕДЕНИЕ Часть II настоящего документа является дополнением к Части I, в которой приведены характеристики, учитываемые при валидации аналитических методик. Цель части II данного документа состоит в предоставлении некоторых подходов и рекомендаций для установления различных валидационных характеристик каждой аналитической методики. В некоторых случаях (например, доказательство специфичности) для обеспечения качества фармацевтической субстанции или лекарственного 9 10 препарата может быть использовано сочетание несколько аналитических методик. Кроме того, в документе приведены данные, которые должны быть представлены в регистрационном досье.

Необходимо представить и проанализировать все соответствующие данные, собранные в ходе валидации, и формулы, использованные для расчета валидационных характеристик. Допускается использовать иные подходы, чем те, которые изложены в настоящем руководстве.

Выбор процедуры и протокола валидации является ответственностью заявителя. При этом важно помнить, что основная цель валидации аналитической методики состоит в подтверждении пригодности методики для своего целевого назначения. Ввиду своей сложности, подходы к аналитическим методикам для биологических и биотехнологических препаратов в некоторых случаях могут отличаться от описанных в настоящем документе. На протяжении всего исследования валидационных характеристик следует использовать хорошо охарактеризованные стандартные материалы с документированной чистотой. Необходимая степень чистоты зависит от целевого назначения.

В соответствии с Частью I Руководства, в отдельных разделах Части II рассматриваются различные валидационные характеристики. Расположение разделов Части II отражает ход процесса разработки и оценки аналитической методики. На практике, как правило, экспериментальная работа планируется таким образом, чтобы соответствующие валидационные характеристики изучить одновременно, получая надежные полные данные о возможностях аналитической методики, например, специфичности, линейности, диапазоне применения, правильности и прецизионности. СПЕЦИФИЧНОСТЬ Изучение специфичности необходимо осуществлять в ходе валидации испытаний на идентификацию, примеси и количественное определение. Процедуры подтверждения специфичности зависят от целевого назначения аналитической методики. Способ подтверждения специфичности зависит от задач, для решения которых предназначена данная аналитическая методика.

Не во всех случаях удается подтвердить, что аналитическая методика специфична в отношении данного определяемого вещества (полная избирательность). В этом случае рекомендуется сочетание двух или более аналитических методик Идентификация Удовлетворительные испытания на идентификацию должны обладать способностью различать между собой структурно близкородственные соединения, которые могут присутствовать в пробе.

Избирательность аналитической методики может быть подтверждена получением положительных результатов (возможно, путем сравнения с известным стандартным образцом) для образцов, содержащих определяемый компонент, и отрицательных результатов, полученных для образцов, не содержащих его. Для подтверждения отсутствия ложноположительных результатов испытание на идентификацию может быть проведено для веществ с близким строением или сопутствующих определяемому веществу.

Выбор потенциально мешающих проведению испытания веществ должен быть обоснован Количественное определение и испытания на примеси При подтверждении специфичности для аналитической методики с использованием метода хроматографического разделения следует представлять репрезентативные хроматограммы с надлежащим указанием 11 12 индивидуальных компонентов. Необходимо использовать аналогичные подходы к другим методикам, основанным на разделении. Критичные разделения в хроматографии подлежат изучению на соответствующем уровне. В случае критичных разделений должна быть установлена величина разрешения двух наиболее близко элюируемых компонентов. При использовании неспецифического метода количественного определения следует применять дополнительные аналитические методики и подтверждать специфичность всего комплекса методик. Например, если при выпуске фармацевтической субстанции количественное определение проводят титриметрическим методом, то можно его дополнить соответствующим испытанием на примеси. Подход аналогичен как для количественного определения, так и для испытаний на примеси: При наличии образцов примесей При наличии образцов примесей определение специфичности аналитической методики состоит в следующем: При количественном определении необходимо подтвердить избирательность определения вещества в присутствии примесей и/или других компонентов образца.

Практически это осуществляется добавлением к образцу (фармацевтической субстанции или лекарственному препарату) примесей и/или вспомогательных веществ в соответствующих количествах и доказательством отсутствия их влияния на результат количественного определения действующего вещества. При испытаниях на примеси специфичность может быть установлена добавлением в фармацевтическую субстанцию или лекарственный препарат примесей в определенных количествах и доказательством разделения этих примесей друг от друга и/или других компонентов образца. 12 13 При отсутствии образцов примесей Если стандартные образцы примесей или продуктов деградации отсутствуют, специфичность можно подтвердить, сравнивая результаты испытаний проб, содержащих примеси или продукты деградации, с результатами другой хорошо охарактеризованной методики, например, фармакопейной или иной валидированной аналитической (независимой) методикой. В соответствующих случаях они должны включать пробы, подвергшиеся хранению в определенных стрессовых условиях: свет, нагревание, влажность, кислотный/основный гидролиз и окисление.

В случае количественного определения необходимо сравнить два результата. В случае испытаний на примеси необходимо сравнить профили примесей.

Руководство По Валидации Аналитических Методик Проведения Испытаний Лекарственных Средств

Для доказательства соответствия пика определяемого вещества только одному компоненту целесообразно провести исследования на чистоту пиков (например, использование диодно-матричного детектирования, массспектрометрии). ЛИНЕЙНОСТЬ Линейную зависимость необходимо оценить в пределах всего диапазона применения аналитической методики (смотри раздел 3). Ее можно подтвердить напрямую на фармацевтической субстанции (путем разведения основного стандартного раствора) и (или) на отдельных навесках искусственных (модельных) смесей компонентов лекарственного препарата, используя предложенную методику.

Последний аспект допускается изучить в ходе определения диапазона применения (аналитической области) методики. Линейность оценивают визуально по графику зависимости аналитического сигнала как функции от концентрации или количества определяемого вещества. При наличии четкой линейной зависимости 13 14 полученные результаты необходимо обработать подходящими статистическими методами, например, путем вычисления регрессионной линии методом наименьших квадратов. В некоторых случаях для получения линейности между результатами количественного определения и концентрациями проб, до проведения регрессионного анализа требуется математическое преобразование результатов испытаний.

Результаты анализа самой линии регрессии могут быть использованы для математической оценки степени линейности. При отсутствии линейности данные испытаний следует подвергнуть математическому преобразованию до проведения регрессионного анализа. Для подтверждения линейности должны быть определены и представлены коэффициент корреляции или коэффициент детерминации, свободный член линейной регрессии, тангенс угла наклона линии регрессии и остаточная сумма квадратов отклонений, а также приложен график со всеми экспериментальными данными. В некоторых случаях линейность не наблюдается ни при каких математических преобразованиях, например, иммуноаналитические методики. В таких случаях аналитический сигнал необходимо описать с помощью соответствующей функции концентрации (количества) определяемого компонента в пробе. Для установления линейности рекомендуется использовать как минимум пять концентраций. Применение других подходов требует обоснования.

Руководство Еврахим Валидации Аналитических Методик

ДИАПАЗОН ПРИМЕНЕНИЯ (АНАЛИТИЧЕСКАЯ ОБЛАСТЬ) Диапазон применения аналитической методики зависит от ее назначения и определяется при изучении линейности. В пределах диапазона применения методика должна обеспечивать требуемую линейность, правильность и прецизионность.